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腾讯登录ctDNA&cfDNA&CTC那点事儿——临床应用篇
| 导读 | 有研究已经证实，肿瘤患者外周血中的cfDNA总量，要高于健康人。通过这一点，虽然不能武断的说cfDNA能成为肿瘤标志物，但是cfDNA的含量增多，能起到一个较好的提示作用，作为一个初筛的手段。 |
Q1：外周血中的cfDNA的含量，说明什么？
A：有研究已经证实，肿瘤患者外周血中的cfDNA总量，要高于健康人。通过这一点，虽然不能武断的说cfDNA能成为肿瘤标志物，但是cfDNA的含量增多，能起到一个较好的提示作用，作为一个初筛的手段。
Q2：基于cfDNA的液态活检（对于肿瘤来说既是ctDNA），是否只应用于肿瘤？
A：尽管ctDNA在肿瘤诊疗中的应用是当下cfDNA最广泛，研究最深入的分支。但是，cfDNA作为液态活检，不只是局限于肿瘤学。例如，有研究报道对于接受器官移植手术的病人，可以通过监测术后外周血中具有捐献者基因特征，片段化的cfDNA含量变化，来评估移植器官的排斥情况。
2.关于ctDNA的事儿
Q1：ctDNA能够检测到哪些遗传变异情况？
A：ctDNA中能够检测到的遗传变异信息非常丰富，从简单的点突变和indel到复杂的结构变异（structural variation），甚至染色体拷贝数变异都能够检测到。在表观遗传层面，ctDNA中可以检测到基因启动子区的甲基化。在细胞器遗传物质层面，ctDNA中可检测线粒体DNA（mtDNA）的变异情况。
Q2：是否所有的肿瘤都会产生ctDNA，且能够在外周血中被检测到？
A：因为ctDNA主要是死亡的肿瘤细胞破裂后所释放出来的、片段化的基因组DNA。理论上，所有的肿瘤都会产生ctDNA。但是，ctDNA的检出率是高度依赖于肿瘤发展阶段、肿瘤类型和检测手段这三个重要因素。
肿瘤发展阶段上，ctDNA含量通常在晚期或转移性肿瘤中较高，而在早期或局限性肿瘤中含量较低。肿瘤类型上，有研究表明ctDNA在原发性脑肿瘤（如胶质瘤），肾癌，前列腺癌和甲状腺癌中含量较低（晚期肿瘤中检出率<50%）。检测手段上，数字PCR和BEAMing系统的灵敏度是最高的，在肿瘤早期也有较高的检出率，而同期高通量检测手段（多基因靶向测序或外显子测序）检出率较低。
Q3：为什么原发性脑肿瘤（如胶质瘤）外周血中的ctDNA含量最低？
A：目前认为，主要是因为血脑屏障的阻碍，使得原发性脑肿瘤的ctDNA较难进入到外周血中。作为一种替代方式，有研究表明对于原发性脑肿瘤，可通过脑脊液来检测ctDNA的特征。
Q4：外周血中的ctDNA，能否作为肿瘤诊断的标志物？
A：目前有研究支持ctDNA在作为肿瘤诊断标志物上具有巨大的潜力。在ctDNA在用于诊断方向时，多选取该种肿瘤的频发突变基因作为标志物。但在看到其高特异性的同时，应清楚地认识到其灵敏度有限。因此，ctDNA诊断应用的同时，也要密切结合其他传统诊断的方法。
Q5：外周血中的ctDNA，能否作为肿瘤预后的标志物？
A：外周血中的ctDNA，无论是量，还是特定的基因突变类型（例如KRAS等）都可以作为肿瘤预后的标志物。研究的趋势倾向于，使用肿瘤特异性突变特征（包括突变类型和拷贝数）的变化，作为肿瘤预后的标志物。
Q6：外周血中的ctDNA，能否用来预测治疗效果？
A：外周血中的ctDNA能够用来预测药物治疗的效果，这也是ctDNA作为肿瘤监测应用非常重要的一个方面。它的预测效能主要通过两个方面来体现，一个是肿瘤特异性突变拷贝数的变化，这种变化反映了肿瘤负荷对药物治疗的响应程度；另一个是肿瘤突变类型（主要是指耐药突变）的演化，这种变化反映了肿瘤内部耐药克隆筛选的进程，这将直接导至药物失效。
3.关于CTC的事儿
Q1：CTC的哪些信息可用于临床检测？
A：我们通常通过以下几方面来评估CTC：
1、CTC计数：对标准取样体积中包含的细胞数目进行计数（CellSearch平台的标准取样体积为7.5ml）。
2、CTC抗原特征：通过对CTC上特定肿瘤相关抗原染色（如Her2等）。
3、CTC基因组信息：对CTC上的肿瘤突变（单细胞测序），染色体异常（荧光原位杂交）等。
随着CTC分离和单细胞检测技术的飞速发展，未来可能了解更多关于CTC单细胞的RNA信息（包括mRNA，miRNA和lncRNA），以及CTC活细胞的功能，例如细胞迁移能力，细胞分泌特定因子情况。
Q2：目前通过FDA认证的CTC临床应用有哪些？
A：目前FDA认证的CTC应用，主要是指通过CellSearch平台的CTC计数来辅助评估转移性乳腺癌、转移性前列腺癌和转移性结直肠癌的疾病进展，主要包含以下几个方面：
1、接受化疗的癌症患者基线的CTC数量（Cut-off值：乳腺癌/前列腺癌是5个CTC/7.5ml血，结直肠癌是3个CTC细胞/7.5ml血），可预测治疗后无进展生存时间和总生存时间，以此作为患者是否需要接受辅助化疗的参考；
2、接受化疗的癌症患者CTC的数量变化，可预测治疗后的无进展生存时间和总生存时间，以此作为肿瘤进展、转移复发风险评估的参考；
3、接受化疗的癌症患者CTC数量，可用于实时反映肿瘤负荷，以此作为肿瘤药物耐药性的监测。
Q3：CTC能否用于肿瘤早期筛查/诊断？
A：有研究探索CTC在肿瘤高危群体中早期筛查/诊断中的应用价值（如肺癌、胰腺癌）。结果提示，在极少数肿瘤高危人群中的确能够检测出CTC，能够很准确地提示肿瘤的发生，并且远早于影像学证据。
CTC在肿瘤早期筛查/诊断中的难点在于：
1、CTC在肿瘤患者外周血中含量很低，在癌前病变或肿瘤早期数目更加稀少。这对应用于肿瘤早期筛查/诊断的CTC检测技术，提出了更高的要求。因此，相关研究较多地采用CTC检出率较高的技术（例如阴性富集策略，微流体检测策略）。而CellSearch平台，较少地在应用于该方向（良性肿瘤检出率基本为0）。
2、CTC应用于肿瘤早筛，较多的基于特定类型肿瘤的高危人群（例如慢性阻塞性肺病和肺癌）开展分析和相应推论。但就检测到CTC所选取的特征值（如数量，CD45抗原阴性，EpCAM阳性，特定肿瘤基因突变等），只能推断这种细胞可能是恶性肿瘤细胞，而不能进一步确诊为何种肿瘤细胞。未来的研究，应进一步完善单细胞水平上肿瘤类型的区别性诊断方案（例如肿瘤特异性抗原染色）。
Q4：CTC能否能够应用于靶向治疗药物的疗效预测及监测？
A：在乳腺癌CTC相关的临床研究中，大部分结果支持CTC计数（Cut-off值为5）在各种亚型（组织学或免疫组织化学诊断，包括Her2阳性，三阴等亚型）中均与病人的预后密切相关。这种相关性与患者选择的治疗方式无关，无论是靶向治疗还是传统化疗。
（转化医学网360zhyx.com）
评论：
共有 1 条评论
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游客2019-01-03 08:58:11：ctDNA是循环肿瘤DNA，是原发肿瘤甚至是转移形成的新肿瘤上的细胞破裂掉落下来的DNA片段，也是进入了外周血循环系统。ctDNA对于肿瘤早筛、用药和预后都是非常有意义的！当然技术上也更难。科研上研究提取使用的试剂盒较多，我们实验室用的较多的是BIOGI，QIAGEN。
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