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腾讯登录NanoPro 纳米级超灵敏蛋白质分析技术检测帕金森病生物标志物DJ-1
| 导读 | 帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种常见的神经系统变性疾病，为老年人所多见。DJ-1是帕金森病的典型生物标志物，该标志物及各种修饰异构体的检测定量对于临床诊断及治疗评估十分重要 |
帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种常见的神经系统变性疾病，为老年人所多见。
DJ-1是帕金森病的典型生物标志物，该标志物及各种修饰异构体的检测定量对于临床诊断及治疗评估十分重要。但该蛋白及异构体的检测非常困难，传统方法基于双向电泳及液质联用，重复性差，定量困难，动态范围低等。因此限制了该疾病的深入研究。本文介绍一种全新的检测平台如何轻松通过毛细管等点聚集技术，成功定量检测到脑样品中各种复杂DJ-1异构体。
技术上，采用革新的毛细管等点聚焦技术，DJ-1在两性电解质中进行自动化电泳，不同的修饰异构体根据各自等电点得以分开，然后利用通用抗体进行杂交识别，进而实现不同异构体的检测及定量。整个平台自动化程度高，放置样品及抗体后整个系统自动运行，直至产生最终结果，克服了众多人工步骤所导致的重复性及重现性差等缺点；检测通量高，最高可达96个样品/次，因此适合检测大量不同处理设计后的样品，如对照组与处理组，处理组的不同剂量等；另外，系统的S/N值及动态范围都比较宽，能以较强的稳健性进行差异悬殊的样品间定量比较。
实验设计上，文章比较了高脂饮食下，帕金森病DJ-1在小鼠脑组织及人脑脊液中的各修饰异构体的表达量变化。揭示出DJ-1的某些异构体峰在高脂饮食下与对照组存在显著的差别。因此，这些异构体峰可作为潜在的早期临床诊断、疾病分型或治疗评估指标。
典型结果：
上图中，绿色显示了小鼠DJ-1缺失组，蓝色显示DJ-1正常组。DJ-1缺失组未检测到信号，显示了基线水平，而DJ-1正常组检测到各种异构体峰，说明了该检测的有效性及靶标特异性。即：检测到的各个峰就是我们的靶标DJ-1。
上图中，显示了独立的20次实验峰型叠加图，所有峰型轮廓几乎完全重叠。显示了该系统强大的实验重复性及重现性。利用该系统进行检测，数据十分稳健，实验结果高度可信。
上图中，将DJ-1在对照组与高脂饮食组进行了表达比较。发现第3、4、6号峰对应的异构体在两组之间存在显著性差异。
要点概括：
1. DJ-1是Parkinson的重要生物标志物，亟需检测手段用于基础研究、疾病诊断、治疗评估。
2. NanoPro1000利用等点聚焦技术，轻松分离定量DJ-1各种异构体。
3. DJ-1各种异构体检测只需一种通用性抗体，无需位点特异性。
4. NanoPro1000检测通量高，不同实验设计或临床采集的大量样本可一次检测完成（96个）。
5. NanoPro1000毛细管技术完全自动化运行，上样、电泳、固定、抗体杂交、洗涤、启动信号、数据定量（此处省略10万字）等完全不需人工干预。
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参考文献：
CIEF immunoassay to measure DJ-1 isoforms / D. Besong Agbo et al. / Anal. Biochem. 443 (2013) 197–204
（转化医学网360zhyx.com）
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