中科学家利用CRISPR-Cas9技术在CART细胞中实现多基因编辑

CART（Chimeric Antigen Receptor T cell）细胞治疗是非常有前景的肿瘤治疗方法，中文翻译为“嵌合抗原受体T细胞”。嵌合抗原受体（Chimeric Antigen Receptor，CAR）是由人工设计合成的跨膜蛋白，包括细胞外、跨细胞膜以及细胞内三个部分。CAR的细胞外部分主要是识别特定抗原的单克隆抗体可变区（scFV），负责识别特异性抗原。跨膜区确保CAR可以在细胞膜上定位，而细胞内区域则负责激活T细胞，产生T细胞介导的免疫反应。临床数据表明，CART在B细胞恶性肿瘤治疗中取得了很好的疗效。但是，目前采用的方法都是自体过继细胞治疗（autologous adoptive cell transfer，ACT），这种方法昂贵并且耗时。对于新生儿及老年患者，很难获得足量且状态良好的淋巴细胞用于CART细胞治疗。因此目前CART细胞治疗的一个重要研究方向是怎样使用一个健康献血者的T细胞制备大量的CART细胞，满足数百名患者的临床使用。这一技术的建立将极大降低CART疗法的成本，可以更好地保证统一制备的细胞质量，而且患者在需要时可以马上得到CART细胞进行治疗。

使用异体供者T细胞制备通用型CART用以治疗多个患者，必须保证其安全性，确保过继细胞不能攻击患者自身细胞，同时需要降低其自身的免疫原性避免宿主细胞的攻击。中国科学院动物研究所王皓毅研究组利用CRISPR-Cas9技术将αβT-cell receptor （TCR）从异体的CART细胞中敲除，避免移植物抗宿主病（graft-versus-host-disease，GVHD）的发生，将人类白细胞抗原（HLA）敲除降低自身的免疫原性。另外，PD-1是同肿瘤免疫逃逸相关的T细胞表面抑制因子，考虑到阻断PD-1信号通路在许多肿瘤类型中都取得了较好的疗效，研究人员同时在CART细胞中敲除了PD-1基因，来阻断PD-1信号通路。制备异体CART细胞需要进行多基因同时编辑，CRISPR-Cas9这一RNA介导的DNA核酸酶系统是非常适合的技术平台。在此项研究中，利用CRISPR-Cas9系统对CART细胞进行双基因（TRAC和B2M）或者三基因（TRAC，B2M及PD-1）敲除。结果表明，这些经过基因编辑的CART细胞同普通CART细胞相比，在体外及体内具有相当或更强的肿瘤细胞杀伤功能，有望成为临床应用的效应细胞。基因编辑技术联合过继免疫在肿瘤及HIV/AIDS治疗中具有广泛的应用前景，这一方法的建立为这些疾病治疗的研究奠定了坚实的技术基础。

该项研究在12月2日以CRISPR-Cas9 mediated multiplex gene editing in CAR-T cells 为题在线发表于《细胞研究》（Cell Research）。

（转化医学网360zhyx.com）