流感季节到来，【呼吸道多重联检全面解决方案】请查收！

在《新冠病毒感染肺炎诊疗方案（试行第七版）》中，也要求对新冠病毒感染的轻型表现与其他病毒引起的上呼吸道感染鉴别，主要包括流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒等，需要通过快速抗原检测和多重PCR核酸检测等方法，对常见的呼吸道病原体进行检测。

什么是呼吸道联检？
为防范新冠和流感等呼吸道疾病共同流行, 呼吸道联检可通过一份样品、一次检测就可以诊断或排除多种病原体，从而显著提高诊断效率。
呼吸道的感染是临床上最为常见的临床疾病，呼吸道病原体一般通过呼吸道飞沫，密切接触传播，甚至是气溶胶传播，感染人群非常巨大，且呼吸道感染非常容易重复感染。

呼吸道联检有抗原抗体检测和分子核酸检测。尤其在新冠暴发之后，分子核酸检测作为病原体确诊的金标准， 呼吸道分子多联检测更是成为了热门赛道。
据很多专家意见：呼吸道多联检分子市场，是未来分子企业的必争之地，可能是未来分子企业的超级现金奶牛。

季节性气温的下降，再加上人们呆在室内，容易造成常见呼吸道病毒(如流感和呼吸道合流病毒)传播的急剧增加。

然而，去年由于保持社交距离和佩戴口罩的政策，流感季节得到了缓解，流感发病率创下历史新低。相比之下，今年随着社区重新开放和许多政策放松，专家预计COVID-19和流感的传播将同时大幅增加。对于一个在过去18个月里已经承受巨大压力的医疗系统来说，这一消息令人担忧。

使用多重联检检测流感、COVID和RSV等呼吸道病毒来更快、更有效地诊断和治疗患者非常必要！！多重联检通过使用单一样本对多种疾病进行检测，可以节省大量时间和资源。

流感、COVID-19、呼吸道合胞病毒（RSV）和其他呼吸道疾病会引起相似症状，如果不进行实验室检测，就不可能进行鉴别诊断。多重联检为医生快速、准确诊断病人并提供正确治疗提供了独特的机会。

这对于流感、COVID-19和RSV等呼吸道感染的诊断治疗很重要，因为这些感染需要不同的治疗手段，错误诊断和治疗会使婴儿或老年人等不同患者群体面临严重并发症的风险。

多种检测技术被用于多重联检，包括:
基于免疫方法的快速抗原检测
使用分子方法的核酸扩增

整个COVID-19大流行期间，由于其高灵敏度和特异性，分子检测仍是主要的诊断方法。然而，分子检测通常需要在实验室中进行，涉及复杂的样品运输，容易受到检测机器承载力和试剂供应瓶颈的影响，所有这些都影响样品到出结果的周转时间，可能长达数天。

相比之下，快速抗原检测使用更灵活，可以在护理点(如学校或机场)使用，并且更快速可以在不到10-15分钟内提供结果。但是这种检测方法相较于RT-qPCR灵敏度较低 （低于80%甚至更多)(CDC 2021)。抗原检测容易发生交叉反应，与分子检测相比起来有更高的假阳性率和假阴性率。

根据可用资源、所需的准确性和紧急程度，一种测试方法可能在特定情况下比另一种更有用。

分子多重检测
分子多重检测可以一次检测多个靶标，从而能大大降低成本。与单重检测相比，多重检测使用更少的试剂，更少的时间和更少的劳力来达到相同的结果。

分子检测的性能取决于其准确检测低水平病原体的能力，而在多重检测中，这一挑战将大大增加。同一样本中不同检测靶标含量的不同可能可能导致一个靶标比另一个靶标更优先扩增，低模板浓度引起的PCR漂移。包括扩增序列的特性、长度、GC含量、侧边区域和二级结构的等这些因素都可能引起多重检测中不同靶标扩增的不平衡性，从而对Ct值产生影响(Jong, 2013)。

为了克服这些挑战，使用优化的分子检测试剂以确保多重检测中Ct值保持不变，并保持检测对每个目标的高灵敏度非常重要。

迈迪安公司开发的Fast 1-Step RT-qPCR Mix(MDX032)是专门为多重RT-qPCR诊断检测和高通量自动化平台而设计的。该试剂中含有优化的聚合酶、dNTP、 Mg2+ 和缓冲液（保证pH值在反应过程中没有变化），能提供最佳的多重扩增性能。

分别使用迈迪安的Fast 1-Step RT-qPCR Mix(MDX032)(红色)，供应商A (蓝色)和供应商Q(绿色)对 100倍稀释的人体RNA使用四种探针，进行单重（深色）或多重（浅色）扩增。反应设置是：48°C10 min，95°C 5 min，（95°C 10s, 60°C 10s, 72°C 5s）x 35个循环。结果显示了Fast 1-Step RT-qPCR Mix与供应商A和Q相比在多重扩增中具有更高效的扩增，并且与单重扩增相比具有相同的Ct值。 ________________

多重检测的另一个主要问题是可能会因PCR抑制而产生假阴性结果或因PCR扩增子结转污染而产生假阳性结果，特别是在较复杂的多重检测平台上。

大多数检测方案要求在检测前提取DNA或RNA，以去除临床样本(如鼻咽或痰标本)中存在的PCR抑制物。但是核酸提取操作也存在一些潜在问题，例如有可能导致样品损失，并不能完全有效地去除所有的抑制物。

此外，在COVID-19大流行的第一波高峰期间，对分子检测的巨大需求造成了RNA提取试剂的短缺。面对这种供应短缺的挑战，诊断试剂开发商转而寻求直接扩增的替代方法，以免除DNA/RNA提取的步骤。

为了解决这些问题，迈迪安公司开始专注研发抗抑性的分子检测试剂，用于对原始临床样本的直接扩增，而无需进行核酸提取。迈迪安开发的第一个直扩型试剂，抗抑性RT-qPCR预混液(MDX016)，就是专门设计对不同来源的粗裂解液或富含抑制物的样品进行多重定性检测。该试剂可用于直接扩增，从而大大减少检测流程中的步骤，加快检测速度，提高样本到结果的周转时间。

分别从含有5%(黄色)、10%(红色)和20%(黑色)的粪便提取物中扩增4种病原体（诺如和轮状RNA病毒，腺病毒和空肠弯曲菌DNA病毒)。结果显示了MDX016在粪便中抑制物的存在下多重扩增的能力。

POCT分子多重检测
分子检测需要熟练的技术人员，精密的实验室仪器，冷藏运输和储存以维持产品的保质期。这些挑战对一个集中的大型实验室来说是可以应付的，但在需要及时检测（POCT）的场合却不适用。

迈迪安公司开发了两种用于分子检测的POCT试剂：
01 可兼容冻干的分子试剂(Lyo-Ready™)
它是不含甘油、含有优化的专用冻干赋型剂的配方，只需要添加引物和探针即可。该配方可作为液体试剂用于即时多重RT-qPCR诊断检测，或冻干成粉状或粒装用于开发常温稳定的干燥型检测。

Lyo-Ready™1-Step RT-qPCR Mix (MDX024)和Lyo-Ready™1-Step RT-qPCRVirus Mix (MDX062)。目前已在全球各地的注册体外诊断检测中被广泛使用。尤其是MDX062 是专为为具有高度二级结构的RNA或DNA病毒的扩增而设计的(逆转录酶在55-60°C保持活性)。

使用Lyo-Ready™ 1-Step RT-qPCR Virus Mix(MDX062)对灭活病毒粗裂解样本中的呼吸道合胞病毒(RSV)(绿色)、轮状病毒A(紫色)和登革2型病毒(DENV-2)(红色)进行多重RT-qPCR扩增。结果表明，Lyo-Ready™1-Step RT-qPCR Virus Mix可用于多重RT-qPCR检测，从单个样本中同时检测多个低拷贝数RNA靶标。

02 可兼容风干的分子试剂（Air-Dryable™）
它结合了抑制物耐受性和可风干的特点，可用于开发常温稳定的检测。与冻干不同的是，风干相对更快速、便宜，并且可通过普通的烘箱干燥即可。
针对特定样本的Air-Dryable™可风干检测试剂是专为克服唾液/痰液、血液、尿液和粪便中存在的抑制物而设计的优化配方。

尤其是新型的Air-Dryable™Direct RNA/DNA qPCR Saliva Mix (MDX131)是适用于流感/COVID/RSV多重联检的理想选择。其优化的配方可从唾液或痰液粗裂解样本中灵敏检测RNA靶标，只需添加引物和探针即可完成检测。该试剂既可以直接以液体形式使用，也可以通过烘箱或空气干燥成常温稳定的干燥型试剂使用于多重分子检测中。

Air-Dryable™ Direct RNA/DNA qPCR SALIVA(MDX131) 对痰液、粘蛋白、UTM拭子等具有超强的耐受性能。目前该试剂已用于FDA批准的呼吸道多重联检中检测COVID-19，流感，RSV，支原体等常见病原体)。该试剂的灵敏度可以检测低于10个拷贝的靶标，并且可兼容液体或干燥的检测形式。

对含有35%UTM拭子样本中的3种呼吸道病原体(甲型流感、MERS-CoV和RSV)进行多重扩增。结果显示，Air-Dryable™ Direct RNA/DNA qPCR Saliva (蓝色)与供应商T(红色)或供应商Q(灰色)提供的抗抑型试剂相比具有更高的抑制物耐受性和多重扩增性能。

免疫多重检测
分子检测被认为是病毒性呼吸疾病检测的黄金标准，但它们在易使用性、扩展性和即时使用性上有一定局限性。相比之下，侧向流免疫层析技术则非常适合现场及时检测。快速抗原检测具有高度可扩展性，可在室温条件下储存，只需要简单的操作指导，并可在10-15分钟内得出结果。

患者样本中靶标水平的总体多样性是免疫多重检测中面临的挑战。与单重免疫检测相比，多重检测需要能检测达到更大的动态范围，以便检测出样本中不同浓度的靶标。据报道，多重酶联免疫吸附检测比单重酶联免疫吸附检测具有更好的线性(超过3甚至5个数量级)，这是选择抗体时需要考量的一个关键性能在指标。

用于多重检测的抗体必须具有高灵敏度，能够同时检出低浓度和高浓度的靶标，而且必须具有高特异性，不会产生相互交叉反应，也不会与检测混合物或患者样本中的其他蛋白质发生交叉反应。

COVID/流感/RSV的多重免疫检测
COVID: 核衣壳(N蛋白)是新冠快速抗原检测的主要目标蛋白，因为它是存在于SARS-CoV-2病毒表面的含量最高的蛋白组分，在病毒载量低的情况下很容易被检测出来。

迈迪安公司提供的SARS-CoV-2核衣壳蛋白(#9548和#9547)的高灵敏抗体对已被证实可以检测到所有WHO关注的变种(Alpha B.1.1.7, Beta B.1.351, Gamma P.1/P.2和DeltaB.1.617.2)，并在世界各地用于多个FDA和CE批准的商业快速抗原检测中。该抗体检测保守区N蛋白，与甲流/乙流、RSV或季节性冠状病毒株无交叉反应。

流感：快速检测通常检测的是核蛋白(NP)，它是流感病毒中比较保守的蛋白质之一，不太可能发生导致抗原漂移的突变5,6 (引起功能性检测不能识别流感病毒毒株的突变）。免疫检测通常是检测甲流和乙流这样的主要流行季节性毒株。流感病毒是容易发生抗原漂移和重组的RNA病毒，因此每年都能出现新的流感病毒毒株。

迈迪安公司为甲型流感和乙型流感提供了几种高效抗体对，非常适合快速诊断检测，并且不会与RSV或SARS-CoV-2抗原发生交叉反应。

RSV：是儿童疾病的最常见原因之一，可导致婴儿和老年人的严重疾病，如毛细支气管炎和肺炎。几乎每100名6个月以下的RSV感染儿童中就有两名面临住院的风险 (CDC, 2021)。从结构上看，RSV病毒由三种主要蛋白质组成，其中融合蛋白(负责与宿主膜融合)是目前诊断检测和大多数正在开发的疫苗和免疫疗法的主要目标。该蛋白的独特之处在于，它只是引起RSV中和抗体应答的两种抗原之一，在RSV株中具有高度的序列保守性(>90%)(Meng,2014)，并且具有高度的免疫原性。

迈迪安公司提供多种针对RSV融合蛋白的抗体对，它们不与SARS-CoV-2或流感抗原发生交叉反应，可用于快速抗原检测。
尽管免疫多重检测在效率上具有很大优势，但它也存在一些能使检测试剂更加复杂的技术挑战。其中最大的挑战之一是控制实验中各种抗体和蛋白质之间的干扰，稀释样本能有助于限制复杂样品类型中蛋白质和其他物质的干扰。

但是，为了去除潜在的干扰物质，包括内源性抗体，如异质性抗体(HA)(如HAMA)和类风湿因子(RF)，检测中使用免疫阻断剂非常重要。双小鼠单克隆检测，如快速呼吸道抗原检测，特别容易受到HAMA和RF干扰，需要专门的阻断剂来确保检测的准确性。

迈迪安生产多公斤量级的被动阻断剂，如小鼠IgG和动物血清，以及专有的主动阻断剂TRU Block™，它包含针对所有类型异嗜性干扰（包括HAMA和RF）的特定粘合剂，一旦与干扰抗体结合，TRU Block™通过空间位阻阻止HA与其他检测成分的进一步结合。与被动阻断剂相比，主动阻断剂通常可以在较低的浓度下使用，从而最大限度地减少与被动阻断剂相关的检测信号。
总的来说，免疫多重检测需要仔细选择抗体试剂，从而确保检测的准确性。干扰因素应应尽可能最小化，从而防止假阳性或假阴性错误结果。

总   结

同时对多个靶标进行多重检测的方法有几个优点，包括其高通量潜力、可使用单一样品同时检测多个靶标、以及可以减少试剂的消耗。这些优势使得多重联检比传统的单重检测有更高的性价比。

随着大多数国家重新开放，放松社会距离和佩戴口罩的限制，流感、COVID和RSV的传播将出现反弹，有可能在一段时间内超过正常水平。由于许多呼吸道疾病症状相似，仅从临床症状是不可能可靠地将感染的病原体区分开。

在预期高于正常流感季节的情况下，多重联检能解决在SARS-CoV-2、甲流/乙流和RSV感染之间进行筛查的更高需求。

分子多重检测具有很高的灵敏度和特异性，可以在疾病早期得到诊断，并有足够的时间进行适当的治疗。但是分子检测需要先进的设备，经验丰富的技术人员，通常有1-5天的周转时间。
相比之下，免疫快速抗原测定法使用方便，可以在10-15分钟内提供结果，但被认为性能较低，灵敏度较低。分子和免疫检测，都有各自优缺点，可以单独使用，可以两者结合使用。
通过对流感、COVID和RSV的多重联检，无论采用哪种检测方法，患者都将能够更快、更有效地得到诊断和治疗。

扫描关注,并在后台回复：zhyx
获取样品订购promo code！
欢迎联系我们
咨询详情订购样品：
电话：010-85233176
邮箱：info.cn@meridianlifescience.com

美国迈迪安生物科技是一家大规模生产各种抗体，各种病毒抗原，各种重组蛋白质，各类 PCR 多聚酶，各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。40 年以来，迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务，使其有助于推动这些领域的发展。