【推荐】你的qPCR/RT-qPCR检测结果可靠吗？

你的qPCR检测结果可靠吗？

qPCR检测用于体外诊断中要保证检测结果的可靠性和准确性，这对诊断的判断和采取及时的治疗措施非常重要。

比如说在新冠刚爆发初期，RT-qPCR检测假阴性的问题一度比较受关注，有一些阳性检出率甚至低于50%，这在重大传染性疾病防控中造成的影响是至关重大的。

常规的qPCR流程是：样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录（RNA病毒）-扩增-结果读取。

检测出现阴性结果时，例如无扩增或Ct值偏大，我们需要判断的是反应是真的没有检测的目的基因表达呢，还是某个环节出现问题了呢？

通常来说引起假阴性结果的原因可能出现在以下几个环节：

为了避免这种假阴性的发生，需要使用阳性对照来对检测的各个环节进行监控，确保qPCR/RT-qPCR检测结果的可靠性和正确性。

qPCR检测中常见对照

使用提取质控的意义

常见的阳性对照是先从样本中提取DNA/RNA,然后在进行qPCR/RT-qPCR时加入已知拷贝数的DNA或RNA内控。提取后添加内控可以监测PCR反应的扩增效率，但作为提取对照没有价值。因为它无法检测核酸提取的效率和可能残留的PCR抑制剂，因此并不能作为分子检测从核酸提取到qPCR检测步骤完整的质控。

理想的情况是，在qPCR之前，在检测样品中添加提取质控，使它们经过完全相同的处理（从核酸提取到PCR扩增），以作为阳性对照用来监控从样本提取到PCR检测的整个过程，验证结果的可信性。

有效监控样本处理和qPCR扩增的质控尤为重要。在澳洲和新西兰，IVD检测法规中已经要求必须要包括阴性和阳性对照，很多检测已经开始使用提取质控作为阳性对照，来降低假阴性结果的可能性以便提高检测的准确性和可靠性。

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