虽然血液是各种诊断检测的常用样本,是基因分型分析的理想来源,但长期以来,组织活检福尔马林固定石蜡包埋处理的FFPE样本,也是研究癌症等疾病的宝贵工具,这种技术为了维持细胞核蛋白结构,先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋,以供切片后作组织学诊断或研究使用。
因为可以室温长时间保存,易于运输的特点,FFPE是一种常用的病理组织标本保存方法。
大部分保存的肿瘤组织是FFPE样本,通过新的分子检测技术对这些FFPE样本进行分子水平的研究,用于肿瘤分类,基因型分析,诊断和预后标准,开发肿瘤早筛以及个体化医疗技术提供了有利依据,尤其是这种样本大量存档为回顾性研究提供了宝贵的资源。
但是,FFPE同时也是极具挑战性的样本。因为福尔马林的固定使组织中的核酸发生不同程度的降解和交联,石蜡的高温渗透,以及样本长时间保存和周围环境也会对样本中的核酸产生极大的影响,使得从FFPE样本中提取的DNA含量低,质量差,DNA出现显著的降解和碎片化,样本间质量差异较大。
具体受损的程度取决于组织类型、样本年龄和固定时使用的条件,这些因素可能导致下游应用出现问题,尤其是PCR相关的反应和NGS分析。
一般对FFPE组织进行分子生物学研究,最首先的就是要进行DNA的提取。
常规的方法是先脱蜡,然后结合消化缓冲液和蛋白酶K来消化组织,高温解交联,然后通过提取柱或者磁珠的方法提取核酸。
但是核酸提取的过程耗时、耗钱,并且有交叉污染和样本损失的风险。尤其对于癌症早期筛查或病变时,肿瘤可能还非常小,肿瘤相关DNA含量比较有限,对肿瘤的FFPE样本检测难度更大。
迈迪安Lyo-readyTM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液
迈迪安全新开发的Lyo-ReadyTM基因分型FFPE直扩qPCR 预混液可以直接从FFPE组织中进行SNP等位基因区分,无需DNA提取和纯化,得到快速,精确和高度可重复的集群分辨率。全球shou个直接对FFPE粗处理样本可以直接进行基因分型的产品!
通过提供的缓冲液对FFPE样本进行处理,实现在单管中进行消解释放核酸,而不需要进一步提纯,大大降低了样品损坏、丢失和污染的风险,同时简化和加速检测过程。
此外,该试剂既能用于液体体系也能通过冻干用于开发常温稳定的检测,是用于高通量检测的理想选择。
01。产品亮点 Highlights
•超灵敏:可直接从FFPE粗处理样本中检测低至1拷贝靶标
• 抗抑性:对FFPE组织中存在的PCR抑制物具有超强耐受性
• 特异性:紧密的荧光簇,可清晰地区分等位基因,非常适合困难的SNP
• 可冻干:可用于液体体系或冻干使用,是高通量或POC检测的理想选择
• 兼容新鲜或冷冻组织检测
02。性能数据 Performance
使用MDX168提取缓冲液得到更高DNA提取率
分别使用MDX168提供的提取缓冲液、ATL缓冲液(Qiagen)、G2缓冲液(Qiagen)和GeneJet FFPE试剂盒提取缓冲液(ThermoFisher)对7mgFFPE肺组织进行消解处理,并与使用Qiagen QIAamp FFPE组织DNA提取试剂盒获得的纯化DNA进行比较(作为参考)。*存储在MDX168提取缓冲液中的DNA在室温下可稳定达24小时,在4℃下可稳定达3天。
结果显示,与提纯的DNA或用其他市售缓冲液消解的FFPE组织相比,用MDX168提取缓冲液处理获得的DNA产量明显更高。说明MDX168提取缓冲液对FFPE组织具有较高的DNA提取率。
对FFPE粗处理样本直接SNP分型的簇集更紧密,等位基因区分更好
分别使用 Lyo-ReadyTM 可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液(MDX168), 与对比试剂进行对比,对处理后的FFPE肺肿瘤组织样本中的3种肿瘤靶标进行检测。*KIT24和PDGFRA(Platelet Derived Growth Factor Receptor α,血小板衍生生长因子受体α)都是受体酪氨酸激酶(RTKs)信号通路的一部分。毛细血管扩张性共济失调突变(ATM)是一种作用于p53上游的激酶,控制着解决双链DNA断裂的关键DDR通路。这三种基因突变都能在肺癌组织中发现。结果显示,与对比试剂相比MDX168对肺组织FFPE粗处理样本的检测获得更紧密、更明显的簇集,能更准确地区分等位基因。
FFPE粗处理样本直接SNP分型 VS 提纯gDNA SNP分型
A)使用MDX168对FFPE粗裂解样本的直接SNP检测,或使用Roche(B)和ThermoFisher(C)的对比试剂对等量提纯的gDNA进行SNP检测。
结果显示MDX168的直接SNP检测获得的簇团更紧密,等位基因分辨能力甚至超过提纯DNA的检测。* MDX168也可以用于对FFPE组织提纯的DNA进行SNP检测,能够克服提取过程中的抑制物残留,检测结果会更好!
可检测低至1个拷贝的DNA靶标
分别使用A/ Lyo-ReadyTM可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液的液体(蓝色)和冻干体系(红色)对20% MDX168提取缓冲液中10倍稀释的合成DNA(分别为1,000,100,10和1拷贝)进行检测。
结果显示,冻干后的基因分型FFPE直扩qPCR预混液具有和液体体系具有相同水平的高效扩增能力、灵敏度和重现性。
冻干后可常温保存18个月以上
Lyo-ReadyTM可冻干基因分型FFPE直扩qPCR预混液冻干后在37°C下保存1个月后 (红色)进行稳定性检测,将其复溶后与新鲜配置的液体体系 (蓝色)进行对比,对20% MDX168提取缓冲液存在下的DNA进行检测。
结果表明,冻干后的体系保留了A) qPCR中的ct值和荧光信号值,以及B)等位基因辨别能力,在冻干后在室温下可保持18个月的稳定性。
03。产品信息 Information
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另外,迈迪安还有针对血液样本的可冻干基因分型血液直扩qPCR预混液,点击查看->https://www.biomart.cn/infosupply/107126683.htm->:
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美国迈迪安生物科技是一家大规模生产各种抗体,各种病毒抗原,各种重组蛋白质,各类 PCR 多聚酶,各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。45年以来,迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务,使其有助于推动这些领域的发展。
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