【Adv. Sci.】中山大学发文：转移性黑色素瘤新的靶点和治疗策略

10月18日，中山大学研究团队在期刊《Advanced Science》上发表了研究论文，题为“Neuropeptide Precursor VGF Promotes Liver Metastatic Colonization of Gαq Mutant Uveal Melanoma by Facilitating Tumor Microenvironment via Paracrine Loops”，本研究中，研究人员阐明了神经生长因子诱导基因（VGF），一种分泌型神经肽前体，在Gαq突变UM中的作用。研究人员采用多组学方法，包括转录组和分泌组分析，揭示了VGF在UM进展中的复杂作用。VGF在Gαq突变型UM细胞中表达上调，且与UM患者不良预后相关。靶向VGF可显著抑制UM在体内外的生长。进一步的证据表明，Gαq通过MAPK/CREB通路调控VGF。联合抑制Gαq和MEK可显著降低UM移植瘤的肿瘤负荷。值得注意的是，VGF通过自分泌和旁分泌环路触发UM的肝脏转移定植，并激活肝星状细胞（HSCs）的纤维化，创造有利的微环境。此外，VGF直接结合TGFBR2，调控TGF-β-SMAD信号通路，从而调控内皮-间充质转化（EMT）相关基因，促进肿瘤转移。综上所述，这些发现证实了VGF是Gαq突变UM进展和转移的关键驱动因素，并为UM患者提供了一个有前景的治疗靶点和策略。

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202407967

背景信息

 01 

葡萄膜黑色素瘤（UM）是成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤，主要发生于脉络膜（90%）、睫状体（6%）和虹膜（4%）。UM患者起病隐匿，早期症状易被忽视，确诊时多已处于晚期。不仅如此，近50%的UM患者会发展为转移性疾病，通常在1年内死亡。肝脏是最常见的转移部位，肝转移患者的1年和2年总生存率分别为13%和8%。虽然对原发肿瘤的治疗有效，但UM转移瘤对化疗和靶向治疗的应答较差，通常对免疫检查点抑制剂无应答。目前，还没有有效的治疗方法来预防肿瘤的转移。因此，迫切需要探索潜在的机制，并开发新的有效的治疗方法，以预防和治疗致死性UM转移。

超过85%的UM由GNAQ或α 11 （GNA11）突变引起，其中95%为Q209P/L单位点突变，是UM发病和进展的关键致癌因素。突变型Gαq蛋白有望成为发现抗UM新型化合物的治疗靶点。遗憾的是，直接抑制Gαq的药物，如YM-254890和FR900359，无法区分野生型和突变型Gαq，且难以从天然来源分离和合成，使其具有毒性，不适合临床应用。此外，目前G蛋白通路下游效应分子的抑制剂（如MEK和PKC）在UM治疗中显示出有限的临床获益。因此，迫切需要探索驱动Gαq突变UM进展和转移的新靶点和机制，以改进UM治疗。

VGF触发肝星状细胞纤维化和活化促进UM肝转移

 02 

多项研究表明，HSC是肝纤维化中重要的纤维化细胞类型之一，并可能通过重塑肝转移前微环境促进肝转移。鉴于之前的研究发现VGF调节TGF-β信号通路，而TGF-β信号通路与纤维化密切相关，研究人员下一步研究VGF是否通过活化HSC促进UM细胞在肝脏的定植。

qRT-PCR和免疫印迹分析显示，从Gαq突变的UM细胞（MP41和92.1）获得的CM（同样富含vgf）比从MUM2B细胞获得的CM显著增加LX-2细胞的纤维化相关标志物α-平滑肌作用（α-SMA）和FN的表达。研究人员观察到LX-2细胞被MP41细胞和过表达vgf的MUM2B细胞获得的CM刺激激活。此外，过表达VGF或rVGF处理LX-2细胞后，α-SMA和FN的蛋白水平也增加。α-SMA免疫荧光染色进一步证实了在富含VGF的CM或rVGF处理下LX-2细胞的活化。提示VGF可激活HSC，为UM肝转移提供有利的微环境。

图1：VGF触发肝星状细胞纤维化和活化，促进葡萄膜黑色素瘤肝转移

LX-2细胞全细胞裂解物的免疫印迹分析显示，过表达VGF或rVGF处理也轻微增加了TGFBR2的表达和SMAD3的磷酸化。考虑到VGF是一种分泌蛋白，可以刺激hsc的活化，研究人员想知道UM细胞分泌的VGF是否与HSC中的TGFBR2结合。进一步，研究人员在LX-2细胞中强制表达TGFBR2，然后将LX-2细胞（OE-HA-TGFBR2）暴露于过表达Flag-VGF的MUM2B细胞制备的CM。免疫荧光染色显示UM细胞分泌的VGF也与LX-2细胞表达的TGFBR2相互作用，提示VGF也可能通过旁分泌环通过TGF-β-SMAD信号通路激活HSC。

既往研究发现癌细胞诱导HSC活化，活化的HSC在肿瘤转移过程中进一步反馈促进肿瘤生长和转移。然后，研究人员探索活化的HSC是否会触发UM细胞的生长。在迁移共培养体系中，将UM细胞暴露于LX-2细胞（失活的命名为qLX-2或活化的命名为αLX-2，经TGF-β预处理24 h）的培养环境中，如图1H所示。MP41、92.1细胞与qLX-2、αLX-2细胞共培养后侵袭能力增强，与αLX-2细胞共培养后侵袭能力更强。相比之下，这种治疗对MUM2B没有诱导这样的促进作用。

综上所述，本研究结果表明，VGF可能通过TGF-β-SMAD信号通路，通过自分泌和旁分泌环路触发HSC的活化，活化的HSC进一步反馈增强Gαq突变型UM细胞的侵袭能力，从而促进UM的肝转移定植。本研究加深了我们对UM复杂转移过程的理解，并可能为转移性UM提供新的靶点和治疗策略。（转化医学网360zhyx.com）

【参考资料】

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202407967

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