【BioRxiv】新冠病毒的人工合成：仅凭基因片段便能复活完整病毒，还带绿色荧光！

  近日，瑞士伯尔尼大学的Jorerg Jores和Volker Thiel团队在生物预印本网站BioRxiv上，提出了基于反向遗传学的病毒构造策略：无需从病人样本中提取完整病毒，在病毒核酸序列发表一周内，使用酵母大量生产出有活性的新冠病毒，或依据需求改造出实验所需的病毒工具。这提示了新冠病毒合成改造的快速途径，大大减少了病毒变异为研究带来的困难。

  SARS-CoV-2是一种RNA病毒。研究者们首先依据病毒核酸RNA序列构建出反义的DNA序列。由于整个序列长度大，无法稳定地在工具菌当中稳定复制，因此，研究者们采取了一种成熟而巧妙的办法：转化偶联重组技术（transformation-associated recombination, TAR)。

  研究者将反义DNA拆解成12个长0.5-3.4 kbp具有重叠末端序列的DNA片段，并引入GFP（绿色荧光蛋白序列），利用酿酒酵母中的同源重组系统，使得反义DNA在酵母菌中重组成完整的基因序列。之后，在体外，用T7 RNA聚合酶将反义DNA转录成为有感染性的病毒RNA。通过电穿孔将RNA导入后，发现正常的VeroE6细胞能够被感染并发出荧光。

  此外，研究者们还报道了对其他34种RNA病毒全合成的技术细节，包括冠状病毒科（MERS-CoV）、黄病毒科以及副粘病毒科等。