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腾讯登录【干货】LAMP检测各种常见染料一览
| 导读 | 本文整理了近十年来常用的几种染料，供各位同仁开发LAMP检测试时参考选择。 |
一种金属离子指示剂, 变色原理为:HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色,随着反应的进行,Mg2+与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀,羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色,而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色 。
使用钙黄绿素的时候体系中必须要添加Mn2+，钙黄绿素作为螯合剂会跟Mn2+结合处于猝灭状态，不显示荧光，LAMP反应过程中产生焦磷酸会与Mn2+结合解除淬灭状态，钙黄绿素与Mg2+结合发出黄绿荧光。钙黄素的使用对反应体系当中的 Mg2+的浓度要求很高，所以体系中Mg2+需要优化。
常见的嵌合型荧光染料有：Sybr Green，EvaGreen，Syto。这一类染料会渗入到DNA双链的小沟中，与双链DNA结合以后，荧光信号会增强 800~1000倍。
↓常见的荧光染料整理对比↓
2019年科研人员使用包括Sybr Green，EvaGreen和多种Syto在内多达23种荧光染料进行LAMP检测平行测试，研究显示，Syto82 和Syto9是相对灵敏度最高、对检测没有抑制作用的荧光染料之一（1）。Sybr Green随着反应中DNA扩增产物的不断生成，与双链DNA形成的嵌合物越来越多，会对Bst DNA 聚合酶链置换活性产生抑制作用，从而影响反应速度，所以不适宜在反应前加入。而如果在反应结束以后加入，打开管盖则极易导致气溶胶污染，从而造成假阳性。
当然，通过把荧光染料滴加在反应管的管盖上，反应结束以后，将染料弹入或离心与反应体系混匀，这种操作方式可以避免Sybr Green对反应效率的影响以及产生气溶胶污染。
使用pH指示剂为染料的反应要求反应液低缓冲度（低浓度Tris），pH值8.8以上。pH指示剂染料浓度在50-100uM/反应（2）。
使用pH指示剂作为染料的方法，让低成本、便携式的快速LAMP检测更容易实现和普及，但是，pH染料指示剂不使用所有等温扩增方法，例如解旋酶依赖性扩增(HAD）。
迈迪安LAMP系列
6. 加速灵敏的现场POC检测的研发
更高灵敏度和特异性，更低NTC
使用可风干RT-LAMP预混液(MDX118)(蓝色)与NEB WarmStart®的液体试剂(橙色)分别对EBV DNA (1000 ipc)和MS2 RNA (1000 ipc)进行扩增。 反应条件为65°C，60分钟，TTR为达到荧光阈值的时间。误差条代表的是3次技术重复的标准偏差。结果显示，与NEB WarmStart®相比，迈迪安可风干RT-LAMP预混液反应速度更灵敏，TTR更短，特异性更高，没有非特异性扩增。
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迈迪安公司除了有LAMP分子试剂外，也有性能卓越、广受市场和客户好评的可冻干PCR/RT-qPCR试剂以及各种聚合酶，Bst酶和逆转录酶，能满足不同客户在开发常温稳定干燥型分子检测过程中的不同需求。
邮箱：info.cn@meridianlifescience.com
美国迈迪安生物科技是一家大规模生产各种抗体，各种病毒抗原，各种重组蛋白质，各类 PCR 多聚酶，各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。40 年以来，迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务，使其有助于推动这些领域的发展。
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