显著抑制肿瘤生长并改变微环境！中国医科大学：发现肿瘤特异性免疫治疗靶点

3月27日，中国医科大学刘法昱研究团队在期刊《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》发表了研究论文，题为“Analysis of the effect of CCR7 on the microenvironment of mouse oral squamous cell carcinoma by single-cell RNA sequencing technology”。本研究中，研究人员构建了CCR7基因敲除小鼠和OSCC小鼠模型，并通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)和生物信息学来分析3只CCR7基因敲除小鼠(KO)和3只野生型小鼠(WT)之间OSCC微环境的差异。使用免疫组化、免疫荧光染色和流式细胞术来分析KO和WT组之间显著不同的细胞类型中关键基因的表达。另外，还进行了体外实验来验证CCR7对M2巨噬细胞极化的影响。研究结果表明，CCR7可促进M2型巨噬细胞极化，从而促进口腔鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-024-03013-y#Sec16

研究背景

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口腔癌是全球第六大常见恶性肿瘤。超过90%的口腔癌起源于口腔鳞状上皮组织，这种类型的癌症被广泛称为口腔鳞状细胞癌(OSCC)。目前，主要的治疗方案包括手术切除、化疗和放疗，这些治疗方法增加了患者的发病率。尽管这些传统治疗方法取得了进展，但口腔鳞状细胞癌患者的五年生存率仍低于70%。近年来，免疫治疗受到了极大的关注，并在多种恶性肿瘤中取得了良好的效果。尽管抗PD-1/PD-L1抗体已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗OSCC，但总体缓解率仍然较低。因此，寻找针对OSCC的特异性免疫治疗靶点对患者管理变得越来越重要。

研究方法

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研究人员分析了KO组和WT组因OSCC微环境变化导致的肿瘤生长差异。然后，对WT组(B2、B9、B47)和KO组(B30、B76、B77)的肿瘤进行scRNA-seq。初步质控后共获得70316个细胞。然后，使用Doublet Finder R包排除多细胞的干扰，将无多细胞干扰的58,836个细胞用于后续分析。Seurat R软件包进行数据简化和细胞簇可视化分析，t-SNE软件共显示25个细胞簇。Single R初步的细胞簇可以与部分免疫细胞相匹配，但不能区分成纤维细胞和肿瘤细胞。然后根据报道使用inferCNV R包区分良恶性细胞。最终鉴定出8个簇(1、2、5、6、8、12、14、17)为恶性细胞。另外17个细胞簇被鉴定为良性细胞，然后得到最终的聚类注释结果(见图1h)。

图1：CCR7对小鼠口腔鳞状细胞癌微环境的影响——单细胞RNA测序技术分析

体外实验中，研究人员将THP-1细胞用PMA诱导为M0型巨噬细胞，再用IL-4 + IL-13诱导为M2型巨噬细胞，实时荧光定量PCR结果显示M2组中M2标志物CD206、ARG-1、IL-10和TGF-β的表达水平高于M0组，表明诱导成功。加入CCR7 mAb后诱导作用明显受到抑制，表明CCR7可阻断M2极化。PCI-4B和PCI-37B细胞与M2型巨噬细胞共培养后，细胞迁移和侵袭能力明显增强，而用CCR7 mAb预处理M2型巨噬细胞后，肿瘤细胞(PCI-4B、PCI-37B)的迁移和侵袭能力明显降低。在划痕实验和CCK-8实验中也观察到类似结果，表明CCR7诱导的M2极化可促进肿瘤细胞的存活、迁移和侵袭。为了研究CCR7的作用机制,研究人员根据SCRA-SEQ的结果,还比较了不同细胞之间的基因变化。

研究结论

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以上结果表明，CCR7基因敲除可显著抑制OSCC的肿瘤生长并影响肿瘤的TME, ScRNA-seq和体外实验结果表明CCR7可能通过抑制Dusp1的表达促进M2型巨噬细胞极化，从而促进OSCC的增殖和转移。（转化医学网360zhyx.com）

参考资料：

https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-024-03013-y#Sec16

注：本文旨在介绍医学研究进展，不能作为治疗方案参考。如需获得健康指导，请至正规医院就诊。