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强效抗肿瘤！四川大学华西医院彭勇团队：成功研制两种人源化单克隆抗体！

首页 » 《转》译 2024-08-16 转化医学网赞(2)

导读	ROR1的过表达可促进癌细胞增殖、存活和迁移，在肿瘤发生中发挥关键作用。ROR1已被提议作为潜在的癌症治疗靶点。本研究旨在开发新型人源化ROR1单克隆抗体，并研究其抗肿瘤效果。

8月13日，四川大学华西医院分子肿瘤学研究室彭勇主任及其团队在期刊《Molecular Cancer》上发表了研究论文，题为“Novel humanized monoclonal antibodies against ROR1 for cancer therapy”。本研究中，研究人员发现ROR1在肺腺癌、肝癌和乳腺癌中表达显著升高，通过短发夹RNA靶向ROR1可显著抑制癌细胞的增殖和迁移。研究团队成功开发了两种人源化ROR1单克隆抗体，分别命名为h1B8和h6D4，具有高特异性和亲和力，能够与ROR1蛋白结合。此外，这两种抗体在肺癌异种移植小鼠模型、c-Myc/Alb-cre肝癌转基因小鼠模型和MMTV-PyMT乳腺癌小鼠模型中能够有效抑制肿瘤生长。

https://molecular-cancer.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12943-024-02075-y#Sec30

背景知识

ROR1是一种跨膜糖蛋白，由胞外免疫球蛋白样结构域、Frizzled结构域（也称为富含半胱氨酸结构域）、紧邻膜的Kringle结构域、胞内酪氨酸激酶结构域和两侧的丝氨酸/苏氨酸富集区域以及脯氨酸富集区域组成。ROR1在胚胎和胎儿发育中发挥重要作用，在人类成人组织中表达水平极低。然而，最近在多种癌症中观察到了ROR1表达的升高，包括白血病、肺癌和乳腺癌。此外，高ROR1表达与癌症患者的不良预后密切相关。越来越多的证据表明，ROR1信号通路通过激活多个通路，包括PI3K-AKT通路，对于促进肿瘤生长和转移至关重要。值得注意的是，通过短发夹RNA靶向ROR1在体内被证明能够有效抑制肿瘤生长。因此，ROR1被认为是癌症治疗的理想靶点。

目前，靶向ROR1的几种策略已经开发出来，包括小分子抑制剂、单克隆抗体（mAb）、抗体药物偶联物（ADC）和嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法。体外研究表明，这些方法对于高表达ROR1的血液系统和实体肿瘤具有潜在的治疗效果。由于抗体疗法具有高特异性和低副作用，因此成为一种受欢迎的选择。令人惊讶的是，在一项I期研究中，泽罗妥单抗显示出较长的血浆半衰期，且未出现明显的剂量限制性毒性。因此，迫切需要开发新型人源化抗ROR1抗体用于癌症治疗。

有效地靶向ROR1可以抑制癌细胞增殖和迁移

之前的研究表明，ROR1在肿瘤组织中上调，在肿瘤进展中发挥重要作用，这促使研究人员探索将ROR1作为治疗靶点的潜力。首先，研究人员使用肺癌、乳腺癌和肝癌组织芯片进行了免疫组织化学染色，以分析ROR1的表达情况，结果显示肿瘤组织中ROR1蛋白的表达显著升高，与乳腺癌的转移呈正相关。此外，流式细胞术分析显示，ROR1在乳腺癌细胞（MDA-MB-231和MDA-MB-468）、肺癌细胞（A549、H1975和PC-9）和肝癌细胞（LM3、Huh7和SNU398）中广泛过表达。为了研究ROR1在癌细胞中的功能，研究人员设计了两个shRNA以生成稳定的细胞系。结果显示，LM3、A549和MDA-MB-231细胞中的ROR1表达成功被shRNA敲低。克隆形成试验和MTT试验表明，ROR1缺失有效地抑制了细胞增殖。透膜迁移实验和伤口愈合实验表明，ROR1敲低显著降低了肿瘤细胞的迁移能力。基于这些观察结果，研究人员得出结论，靶向ROR1可以有效抑制癌细胞的增殖和迁移，这意味着ROR1是癌症治疗的一个潜在靶点。

人源化h1B8和h6D4抗体抑制肺癌异种移植小鼠的肿瘤生长

研究人员利用A549皮下异种移植瘤小鼠模型研究了人源化抗ROR1抗体在体内对肿瘤生长的效应。结果显示，给肿瘤小鼠注射抗ROR1抗体可显著抑制肿瘤生长，对小鼠体重影响较小。因此，治疗后肿瘤重量与小鼠体重的比值显著降低。此外，HE染色显示，两种抗体治疗组未引起心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏等器官的损伤。另外，与对照组相比，抗体治疗组的血生化指标（ALB、ALP和ALT）无显著差异，表明无明显的肝毒性。

人源化的h1B8和h6D4抗体能够抑制肺癌异种移植小鼠的肿瘤生长

人源化的h1B8和h6D4抗体在转基因小鼠中能缓解肝癌的进展

有报道c-Myc/Alb-cre双阳性小鼠会发展成肝癌，因此研究人员利用这一转基因小鼠模型来研究人源化抗ROR1抗体对肿瘤进展的影响。首先，研究人员通过流式细胞术和免疫组织化学鉴定出小鼠肝肿瘤中高表达ROR1。然后，通过尾静脉注射每周两次给予小鼠人源化h1B8和h6D4抗体。正如预期的那样，人源化h1B8和h6D4抗体显著减少了转基因小鼠的肝癌，与对照组小鼠相比，HE染色显示肿瘤面积显著减少。值得注意的是，h1B8抗体的治疗效果比h6D4更明显。抗体治疗没有影响小鼠的体重，也没有观察到对小鼠心脏、脾脏、肺和肾脏的明显毒性。更重要的是，抗体治疗有效地缓解了肝癌引起的ALT和ALP水平升高，血生化检测证实了这一点。

人源化的h1B8和h6D4抗体可抑制MMTV-PyMT乳腺癌模型的肺转移

过往研究显示，乳腺肿瘤具有较高的ROR1蛋白表达水平。为了进一步证实人源化h1B8和h6D4抗体的抗肿瘤效果，研究人员使用了MMTV-PyMT乳腺癌小鼠模型。首先，研究人员通过流式细胞术和免疫组织化学验证了乳腺肿瘤中ROR1的高表达。在MMTV-PyMT乳腺癌小鼠模型中，肺是常见的转移部位。因此，研究人员通过每周两次的腹腔注射给小鼠注射抗体，然后观察肺转移情况。结果显示，人源化h1B8和h6D4抗体显著抑制了肺转移，但对体重没有明显的影响。值得注意的是，这两种抗体减轻了乳腺癌小鼠的脾肿大。主要器官的HE染色和血液生化指标显示，这三个组没有明显的毒性。总之，这些数据表明，人源化h1B8和h6D4抗体在体内具有显著的治疗效果。