攻克“仑伐替尼”耐药！南京医科大学发文：肝癌治疗迎来创新靶点

2月18日，南京医科大学研究团队在期刊《Advanced Science》上发表了研究论文，题为“EIF4A3-Mediated Biogenesis of CircFADS1 Promotes the Progression of Hepatocellular Carcinoma via Wnt/β-Catenin Pathway”，本研究旨在揭示新型环状 RNA（circRNA）circFADS1 影响肝细胞癌（HCC）进展的机制。circFADS1 在 HCC 中表达升高，并与不良预后相关。功能上，circFADS1 过表达通过诱导 HCC 细胞增殖和抑制细胞凋亡来加速 HCC 进展。机制上，RNA-seq 分析表明其与 Wnt/β-连环蛋白通路有关。此外，circFADS1 与 GSK3β 相互作用，并通过招募泛素连接酶 RNF114 促进其泛素化和降解，而 EIF4A3 则促进 circFADS1 的生物合成。另外，circFADS1 与仑伐替尼耐药性密切相关。总体而言，本研究揭示了 circFADS1 调节 GSK3β 功能，影响肝细胞癌的进展。EIF4A3/circFADS1/GSK3β/β-连环蛋白轴有望成为肝细胞癌的新型治疗靶点，而 circFADS1 也是仑伐替尼耐药性的一个重要因素。

https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/advs.202411869

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研究背景

肝细胞癌（HCC）约占原发性肝癌的 75% - 85%，在全球癌症发病率中排名第六，在癌症相关死亡率中排名第三。由于症状出现较晚，超过半数的患者在确诊时已处于晚期，此时仅靠手术治疗已不足以有效控制病情。索拉非尼是首个获批用于晚期 HCC 的全身性治疗药物，显著提高了此类患者的总体生存率（OS）。由于与索拉非尼疗效相当，仑伐替尼获批成为第二种一线靶向治疗药物。然而，并非所有 HCC 患者都能从靶向治疗中获益，对仑伐替尼的耐药性逐渐成为其应用中的重大挑战。因此，发现新的 HCC 分子驱动因素和治疗靶点，并确定能够克服仑伐替尼耐药性的靶点至关重要。

环状 RNA（circRNAs）是一类通过反向剪接产生的非编码 RNA，环状 RNA 相较于线性 RNA 更具稳定性。其环状结构所赋予的稳定性在治疗应用方面具有潜力。鉴于环状 RNA 在调节多种细胞活动和病理过程中的作用，其表达失调常与肿瘤发生和临床预后相关。研究人员发现，circACTN4 可与 FUBP1 相互作用以增强 MYC 的表达，从而促进乳腺癌的发生和发展。研究人员还发现，circMET 编码 MET404，驱动胶质母细胞瘤的发生。此外，作为肝细胞癌（HCC）驱动因子的 circPAK1 与仑伐替尼耐药有关。研究人员发现了环状 RNA circERBIN，它作为 miR-1263 的竞争性内源 RNA（ceRNA），靶向细胞周期蛋白依赖性激酶 6 并调控 G1/S 期转换。然而，仍有相当一部分环状 RNA 未被识别和研究。

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环状 RNA FADS1 促进体外肝癌细胞增殖并抑制其凋亡

为了进一步探究 circFADS1 在体外如何影响肝细胞癌（HCC）的进展，研究人员用三种针对其连接区的特异性 shRNA 感染 HepG2 细胞，以建立敲低细胞系。同时，用慢病毒载体感染 Hep3B 细胞，以建立稳定过表达 circFADS1 的细胞系。研究人员通过 qRT-PCR 对 circFADS1 敲低和过表达的细胞系均进行了验证。由于 sh-circFADS1 和 sh-circFADS1-2 的敲低效率更高，因此这两种 shRNA 被用于 HepG2 细胞的进一步功能实验。

CCK-8、EdU 和集落形成实验表明，circFADS1 敲低显著抑制了肝癌细胞的增殖，而 circFADS1 过表达则产生了相反的效果。同时，研究人员发现 circFADS1 敲低促进了 HepG2 细胞的凋亡，而过表达 circFADS1 的 Hep3B 细胞凋亡减少，BAX 和 Bcl-2 蛋白的蛋白质印迹结果进一步证实了这些发现。综上所述，这些结果表明 circFADS1 增强了肝癌细胞的增殖并抑制了其凋亡。

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环状 RNA FADS1 促进体内肝细胞癌细胞生长

为了在体内研究环状 FADS1（circFADS1）对肿瘤发展的影响，研究人员将肝癌细胞皮下注射到裸鼠体内。结果表明，与对照组相比，敲低 circFADS1 的 HepG2 细胞形成的皮下肿瘤在大小或质量上均显著减小。相反，过表达 circFADS1 的 Hep3B 细胞则显著促进了皮下肿瘤的生长。

来自所有四个实验组的异种移植物均用 Ki67、β-连环蛋白和 GSK3β 抗体进行了免疫组化染色。结果分析表明，circFADS1 敲低后 Ki67 染色强度降低，而 circFADS1 过表达则增强了 Ki67 的分布。同时，免疫组化染色显示，circFADS1 敲低后β-连环蛋白表达降低，而过表达时其表达增加，而 GSK3β 的表达趋势则与β-连环蛋白相反。

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环状 RNA FADS1 促进仑伐替尼耐药性

为了探究环状 FADS1（circFADS1）是否在仑伐替尼耐药中发挥作用，研究人员建立了仑伐替尼耐药（LR）细胞系，分别命名为 HepG2 LR 和 Hep3B LR，其亲本细胞系则称为 HepG2 P 和 Hep3B P。研究人员通过 CCK-8 检测法测定半数抑制浓度（IC50），结果显示 LR 细胞系的 IC50 明显高于亲本细胞系。qRT-PCR 结果表明，在 HepG2 细胞系或 Hep3B 细胞系中，LR 细胞系中 circFADS1 的表达均显著高于亲本细胞系。为了探究 circFADS1 水平对肝细胞癌（HCC）细胞仑伐替尼耐药性的影响，研究人员用靶向 circFADS1 的敲低质粒转染 HepG2 LR 和 Hep3B LR 细胞系。首先，将 LR 细胞用 DMSO 或 10 µmol/L 仑伐替尼处理 24 小时，以备后续研究。CCK-8 检测、集落存活实验和流式细胞术表明，在仑伐替尼浓度为 10 µmol/L 时，对 LR 细胞的活力、增殖或凋亡没有显著影响。然而，抑制 LR 细胞系中 circFADS1 的表达显著增强了其对仑伐替尼的敏感性。

接下来，研究人员将敲低 circFADS1 或对照的 HepG2 LR 细胞系接种到裸鼠的侧腹。每天给小鼠注射 2 毫克/千克的仑伐替尼或等量的溶剂对照。同样，在体内实验中，肿瘤体积统计显示，仑伐替尼对 sh-NC 组 HepG2 LR 细胞的致瘤能力没有显著影响，而仑伐替尼剂量显著抑制了 sh-circFADS1 组的肿瘤生长。此外，肿瘤重量也表现出一致的特征。总之，circFADS1 是促进肝细胞癌对仑伐替尼耐药的关键因素。（转化医学网360zhyx.com）

环状 RNA FADS1 与仑伐替尼耐药密切相关

参考资料：

https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/advs.202411869

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