PCR技术现已被广泛用于进行基因检测, 病毒和病原菌检测、转基因食品检测、遗传病、癌症基因检测等领域。在一般qPCR检测中,需要使用专用的试剂盒从待检样品中提取其核酸(DNA / RNA),并经过纯化等复杂的操作(通常称为前处理操作)之后才可以进行qPCR/RT-qPCR。如果直接对样本进行检测,样本中的PCR抑制剂会降低灵敏度和准确性,因此核酸提取是移除这些PCR抑制剂的必要步骤;然而核酸提取是一个有局限性的步骤,DNA或RNA可能在提取过程中损失,从而降低了分子检测的灵敏度。
为了解决这个问题,迈迪安公司为应对COVID-19疫情防控新推出了一款新型抗抑性RT-qPCR预混液 (MDX016),适用于对富含抑制剂的唾液,痰液和粪便样本进行直接高灵敏地多重检测。这款新预混液更省时省力,可免去核酸提取步骤,对需要快速检测控制感染的病毒筛查至关重要。
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该产品最大的优势是:
(1)4X浓度的形式供应,以最大限度的增加样本加入量提高低拷贝数的检出和灵敏度。
(2)单管的配方更易于反应体系的配置和优化,操作过程中只需要添加样本,引物探针即可,更省时省力。
(3)适用于提取过程不复杂或者不耗时的原始样品(唾液,痰液,粪便等)
(4)适用于检测RNA和DNA病原体的单重和多重检测抗抑性RT-qPCR 预混液对来自临床样本中的PCR抑制剂表现出高耐受性
· 痰液样本
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在含5%痰液或不含痰液样本中加入灭活流感病毒的扩增曲线。结果表明,使用抗抑性RT-qPCR预混液(MDX016)对含有5%痰液的病毒样本扩增(红色)与使用快速一步法RTqPCR预混液(MDX032)对不含痰液的病毒样本扩增(蓝色)一致。相比之下,快速一步法RT-qPCR预混液(MDX032)对含有5%痰液的病毒样本扩增(黑色)从灵敏度和扩增性能上相比均显著降低。
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在含1.25%痰液的样品中加入灭活流感病毒的扩增曲线。结果表明,与标准的快速一步法RT-qPCR预混液MDX032(黑色)相比,抗抑性RT-qPCR预混液 MDX016(红色)对痰液中抑制剂的耐受性更高。
· 唾液样本
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在分别含有10%或20%的唾液拭子(COPAN ESwab 359C)中加入甲型流感病毒,分别使用MDX016(红色)和MDX032(黑色)对甲型流感病毒进行扩增。结果表明,与普通RT-qPCR M预混液(MDX032)相比,抗抑性RT-qPCR 预混液(MDX016) 使Ct值更提前并且获得更高的荧光信号。说明,抗抑性RT-qPCR 预混液(MDX016) 对检测原始唾液拭子样本中的RNA病毒性能比普通RT-qPCR M预混液(MDX032)更优越。
· 粪便样本
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分别从含有5%(黄色)、10%(红色)和20%(黑色)的粪便提取物中扩增4种病原体(诺如和轮状RNA病毒,腺病毒和空肠弯曲菌DNA病毒)。结果显示了MDX016在粪便中抑制剂的存在下多重扩增的能力。
在欧洲,已有一些大型诊断公司与迈迪安合作使用了该产品用于开发COVID-19免核酸提取检测试剂, 不仅克服核酸提取试剂盒短缺的替代方法,同时缩短了整个核酸诊断流程所需的时间。
上个月,FDA宣布第一次紧急授权COVID-19分子检测样本集中采集。这项技术对于筛查患病率较低的患者群体是有效的,因为大多数结果都是阴性的,因此可以在使用较少资源的情况下快速处理大量样本。
然而,混合采样可能影响RT-qPCR检测的灵敏度,因为低病毒载量的阳性标本可能低于检出极限。为了提高混合样本的检测性能,必须采用能够保留最大量的核酸的策略,并且需要具有高灵敏度和抑制剂耐受性的高效酶。
迈迪安公司的抗抑性RT-qPCR预混液是开发混样检测的理想选择。该产品以4X浓缩形式提供,能够在低拷贝数模板和PCR抑制剂存在的情况下进行稳健的扩增。高浓度有助于最大限度地增加样本输入量和核酸浓度,较高的灵敏度允许检测低病毒载量的阳性样本。
抗抑性RT-qPCR 预混液的检测灵敏度
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关于迈迪安生命科学公司:
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迈迪安生命科学公司是一家大规模生产各种抗体,各种病毒抗原,各种重组蛋白质,各类PCR多聚酶,各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。40年以来,迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务,使其有助于推动这些领域的发展。
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